產品分類

當前位置:快檢產品 > 真菌毒素檢測 > 免疫親和柱 > 列表
黃曲霉毒素B1

產品類別:免疫親和柱
發布日期:2014-08-20 13:15:33
規格型號:ZYD-HQMDSB1
商 家:北京智云達科技股份有限公司

詢問價格或留言
更多
產品說明供應商信息配置清單

黃曲霉毒素B1免疫親和柱操作說明書

【概要】

黃曲霉毒素(Aflatoxin)是黃曲霉、寄生曲霉等真菌產生的次級代謝產物,被世界衛生組織的癌癥研究機構劃分為1類致癌物,同時又是一種毒性極強的劇毒物質,廣泛存在于各種食物中。玉米,花生,大米,小麥等谷物及其副產品是黃曲霉毒素的主要來源,同時飼料中的黃曲霉毒素B1經過動物代謝后產生的黃曲霉毒素M1仍然具有很強的毒性和致癌性,也廣泛存在牛奶,血液,組織等食品中。黃曲霉毒素作為肝癌的三大誘因之一,也是誘發胃癌,腸癌等疾病的主要原因之一,對人類的健康構成很大威脅。世界各國對食品,飼料中的黃曲霉毒素都有嚴格的限量標準。


【適用范圍及性能】

用于定性、定量檢測谷物、副食品、酒類等食品和飼料等樣本中的黃曲霉毒素總量B1時的樣品前處理。

柱容量:≥200ng

回收率:≥90%


【試驗原理】

本產品的測定的基礎是抗原抗體反應,黃曲霉毒素B1單克隆抗體連接在柱內凝膠上,樣品中的黃曲霉毒素B1經過提取、過濾、稀釋,然后將樣品提取液緩慢的通過黃曲霉毒素B1免疫親和層析柱,在免疫親和柱內,毒素與抗體結合,之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結合的其他物質。用甲醇洗脫黃曲霉毒素B1,然后注入到分析儀器中用于檢測。


【包裝組成】

根據不同規格,每一個盒中包含5-25支黃曲霉毒素免疫親和層析柱及1份說明書。


【需要而未提供的設備及試劑】

設備:

┅┅高速均質器或組織勻漿機

┅┅粉碎機

┅┅200ml/50ml量筒

┅┅天平:感量0.1g

┅┅微量移液器:單道 100?l~1000?l

┅┅槽紋濾紙(折疊快速定性或定量濾紙)

┅┅玻璃微纖維濾紙(1.5?m孔徑)

┅┅50ml漏斗

┅┅一次性玻璃試管

┅┅泵流操作架(包括空氣泵,不同容積的玻璃注射器等)

試劑:

┅┅甲醇(色譜級)

┅┅蒸餾水或去離子水

┅┅pH7.0磷酸鹽緩沖溶液(PBS):稱取8.0g氯化鈉,1.2g磷酸氫二鈉,0.2g磷酸二氫鉀,0.2g氯化鉀,用990mL純水溶解,然后用濃鹽酸調節pH值至7.0,最后用純水稀釋至1000mL

┅┅吐溫-20/PBS溶液(0.1%):取1mL吐溫-20,加入PBS緩沖溶液并定容至1000mL

【試劑配制】

樣品提取液:根據不同的樣品配置不同濃度的甲醇水溶液,作為樣品提取液。


【樣本處理步驟】

(一)花生,玉米,大米,小麥及其制品,植物油脂和飼料

┅┅取25g粉碎的樣品(植物油脂直接取樣,無需處理)與125mL甲醇-水(7:3)溶液混合;

┅┅加入5.0g氯化鈉以均質器高速攪拌,提取2分鐘;

┅┅4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾;

┅┅取15mL濾液并加入30mL水稀釋,用玻璃微纖維濾紙過濾,取稀釋后液體待測;

┅┅將免疫親和柱連接于20.0mL玻璃注射器下。準確移取15.0mL樣品提取液注入玻璃注射器;

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調節壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過柱體;

┅┅以10.0mL水淋洗柱子2次,棄去全部流出液,并使2mL~3mL空氣通過柱體;

┅┅準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫,流速為1 mL/min ~2mL/min,收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測用。


(二)醬油

┅┅取50g試樣與100mL甲醇-水(8:2)溶液混合;

┅┅加入2.5g氯化鈉以均質器高速攪拌,提取1分鐘;

┅┅4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾;

┅┅取10mL濾液并加入40mL水稀釋,用玻璃微纖維濾紙過濾

┅┅取稀釋后液體待測;

┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器;

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調節壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過柱體;

┅┅用10.0mL 0.1%的吐溫/PBS清洗,再以10.0mL水淋洗柱子2次,棄去全部流出液,并使2mL~3mL空氣通過柱體;

┅┅準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫,流速為1 mL/min ~2mL/min,收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測用。


(三)食醋

┅┅取5g試樣,加入1.0g氯化鈉;

┅┅以pH7.0磷酸鹽緩沖溶液稀釋定容至25.0mL;

┅┅4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾;

┅┅取10mL濾液并加入10mL水稀釋,用玻璃微纖維濾紙過濾

┅┅取稀釋后液體待測。

┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器;

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調節壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過柱體;

┅┅用10.0mL 0.1%的吐溫/PBS清洗,再以10.0mL水淋洗柱子2次,棄去全部流出液,并使2mL~3mL空氣通過柱體;

┅┅準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫,流速為1 mL/min ~2mL/min,收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測用。


【結果判定】

經免疫親和柱凈化后,收集到的甲醇洗脫液可直接使用熒光計或者HPLC檢測,也可使用薄層色譜或者酶聯免疫試劑盒進行檢測。收集到的1mL洗脫液中的黃曲霉毒素B1含量相當于1g樣品中黃曲霉毒素B1含量。


【高效液相參考譜圖】


【注意事項】

┅┅黃曲霉毒素危害極大,應戴手套操作。

┅┅使用過的玻璃容器及黃曲霉毒素溶液最好用5%濃度次氯酸鈉溶液浸泡過夜。

┅┅不要使用過了有效日期的免疫親和柱。


【貯藏條件及保存期】

貯藏條件:親和柱可于常溫保存,2-8℃儲存可延長有效期,不可凍存

保存期:該產品有效期為12個月。




相關產品
?
2019生肖买马资料!